本发明公开了一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂，将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂，在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减。本发明可以直接利用外界营养因素增加奶山羊X精子比率，从而达到简便、快速地实现精子中X精子的分离，大幅度降低了分离成本，能够获得更多的雌性胚胎，从而有助于提高养殖业经济效益，同时也有利于性控技术在畜牧业领域的推广和应用。
1.一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，包括以下操作：将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂：第7～13周为断奶后、第14～19周为初情期、第20～25周为性成熟期、第26～30周为初配期、第31周后为体成熟期；在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减；以质量比计，断奶后阶段内叶酸的补充比例为混合精料的3.0～4.0‰，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶以0.5～1.0‰递减；VB12的补充量为叶酸的1/60～1/40，蛋氨酸的补充量为叶酸的1/2～1/3。
2.如权利要求1所述的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，所述的叶酸、VB12和蛋氨酸的补充比例如下：断奶后：3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸；初情期：2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；性成熟期：1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；初配期：1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；体成熟期：0.8～1.2‰的叶酸、0.01～0.02‰的VB12和0.3～0.5‰的蛋氨酸。
3.如权利要求1或2所述的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，叶酸的补充比例以0.5‰递减，VB12的补充比例以0.01～0.015‰递减，蛋氨酸的补充比例以0.2～0.3‰递减。
4.如权利要求1或2所述的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，基础日粮中的混合精料包括玉米、麦麸、菜籽粕、豆饼、鱼粉、食盐和预混料，并在断奶后阶段、初情期阶段补充骨粉；断奶后阶段基础日粮包括500g的干草、200g的混合精料，并配以300g的全奶；自断奶后阶段到体成熟期阶段，每阶段的基础日粮增加500g的干草、50g的混合精料；自初情期阶段开始补充0.5个鸡蛋，并在以后的每个阶段增加0.5个鸡蛋。
5.如权利要求1所述的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，以质量分数计，所述的混合精料构成如下：断奶后：45％的玉米、25％的麦麸、15％的菜籽粕、5％的豆饼、5％的鱼粉、1％的食盐和1％的预混料，并配以3％的骨粉；初情期：50％的玉米、22％的麦麸、12％的菜籽粕、5％的豆饼、5％的鱼粉、1％的食盐和2％的预混料，并配以3％的骨粉；性成熟期：55％的玉米、20％的麦麸、10％的菜籽粕、7％的豆饼、5％的鱼粉、1％的食盐和2％的预混料；初配期：55％的玉米、20％的麦麸、10％的菜籽粕、7％的豆饼、5％的鱼粉、1％的食盐和2％的预混料；体成熟期：60％的玉米、15％的麦麸、10％的菜籽粕、7％的豆饼、5％的鱼粉、1％的食盐和2％的预混料。
6.如权利要求1所述的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，其特征在于，在达到初配期或体成熟后，分别采集雄性奶山羊的精液，先进行X/Y精子比率分析，然后分离X精子并进行体外受精。
7.一种增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，其特征在于，由叶酸、VB12和蛋氨酸构成的第1段营养添加剂，以质量分数计，包括1段基准量的3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸，1段基准量为180～200g；所述第1段是指奶山羊出生后第7～13周；还包括第2段营养添加剂；以质量分数计，所述的第2段营养添加剂包括2段基准量的2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；2段基准量为220～250g，所述第2段是指奶山羊出生后第14～19周。
8.如权利要求7所述的增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，其特征在于，还包括第3段营养添加剂；以质量分数计，所述的第3段营养添加剂包括3段基准量的1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；3段基准量为300～350g，所述第3段是指奶山羊出生后第20～25周。
9.如权利要求8所述的增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，其特征在于，还包括第4段营养添加剂、第5段营养添加剂；以质量分数计：所述的第4段营养添加剂包括4段基准量的1.0～2.0‰的叶酸、0.03～
0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；所述第4段是指奶山羊出生后第26～30周；4段基准量为450～500g；所述的第5段养剂包括5段基准量的0.8～1.2份的叶酸、0.01～0.02份的VB12和0.3～0.5份的蛋氨酸；所述第5段是指奶山羊出生后第31周后；5段基准量为500～550g。技术领域
本发明属于动物繁育技术领域，涉及一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂。
背景技术
性别控制是一项能显著提高养殖业经济效益的技术。目前主要是通过XY精子分离和早期胚胎性别鉴定来实现。关于XY精子分离最有效的方法是流式细胞分离法,但该技术分离速度有限,分离成本昂贵，专门化的设备限制了其在生产中的应用，远远不能满足生产上对性控精液的大量需求；与之相比H-Y抗原分离法是一种简洁的精子分离方法,但由于H-Y抗原的特异性较差，分离效果始终不能达到人们满意的要求。早期胚胎性别鉴定必须采用分子生物学技术，对人员的要求较高，并且破坏胚胎的结构。反刍动物对繁殖性能与营养因素有直接的关系，对于雄性反刍动物的繁殖而言，性成熟前对营养的敏感程度要明显高于成年，这种营养对于睾丸的组织学变化将是永久性的。营养对睾丸的这种影响是通过改变曲细静管的大小和精子的生成从而影响繁殖性能。雄性动物出生时睾丸内含有大量精原细胞，随着进一步发育到性成熟，精原细胞经过一系列分化的同时，有大量的精细胞被降解和吸收，仅有部分形成生精。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂，通过奶山羊的合理饲喂以提高X精子比率，从而简便、快速地获得更多的雌性胚胎。本发明是通过以下技术方案来实现：一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，包括以下操作：将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂：第7～13周为断奶后、第14～19周为初情期、第20～25周为性成熟期、第26～30周为初配期、第31周后为体成熟期；在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减；以质量比计，断奶后阶段内叶酸的补充比例为混合精料的3.0～4.0‰，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶以0.5～1.0‰递减；VB12的补充量为叶酸的1/60～1/40，蛋氨酸的补充量为叶酸的1/2～1/3。进一步，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，所述的叶酸、VB12和蛋氨酸的补充比例如下：断奶后：3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸；初情期：2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；性成熟期：1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；初配期：1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；体成熟期：0.8～1.2‰的叶酸、0.01～0.02‰的VB12和0.3～0.5‰的蛋氨酸。更进一步，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，叶酸的补充比例以0.5‰递减，VB12的补充比例以0.01～0.015‰递减，蛋氨酸的补充比例以0.2～0.3‰递减。所述的基础日粮中的混合精料包括玉米、麦麸、菜籽粕、豆饼、鱼粉、食盐和预混料，并在断奶后阶段、初情期阶段补充骨粉；断奶后阶段基础日粮包括500g的干草、200g的混合精料，并配以300g的全奶；自断奶后阶段到体成熟期阶段，每阶段的基础日粮增加500g的干草、50g的混合精料；自初情期阶段开始补充0.5个鸡蛋，并在以后的每个阶段增加0.5个鸡蛋。以质量分数计，所述的混合精料构成如下：断奶后：45%的玉米、25%的麦麸、15%的菜籽粕、5%的豆饼、5%的鱼粉、1%的食盐和1%的预混料，并配以3%的骨粉；初情期：50%的玉米、22%的麦麸、12%的菜籽粕、5%的豆饼、5%的鱼粉、1%的食盐和2%的预混料，并配以3%的骨粉；性成熟期：55%的玉米、20%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的鱼粉、1%的食盐和2%的预混料；初配期：55%的玉米、20%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的鱼粉、1%的食盐和2%的预混料；体成熟期：60%的玉米、15%的麦麸、10%的菜籽粕、7%的豆饼、5%的鱼粉、1%的食盐和2%的预混料。所述在达到初配期或体成熟后，分别采集雄性奶山羊的精液，先进行X/Y精子比率分析，然后分离X精子并进行体外受精。一种增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，由叶酸、VB12和蛋氨酸构成的第1段营养添加剂，以质量分数计，包括1段基准量的3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸，1段基准量为180～200g。还包括第2段营养添加剂；以质量分数计，所述的第2段营养添加剂包括2段基准量的2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；2段基准量为220～250g；还包括第3段营养添加剂；以质量分数计，所述的第3段营养添加剂包括3段基准量的1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；3段基准量为300～350g。还包括第4段营养添加剂、第5段营养添加剂；以质量分数计：所述的第4段营养添加剂包括4段基准量的1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；4段基准量为450～500g；所述的第5段养剂包括5段基准量的0.8～1.2份的叶酸、0.01～0.02份的VB12和0.3～0.5份的蛋氨酸；5段基准量为500～550g。与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：本发明提供的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂，可以直接利用外界营养因素增加奶山羊X精子比率，从而达到简便、快速地实现精子中X精子的分离，大幅度降低了分离成本，能够获得更多的雌性胚胎，从而有助于提高养殖业经济效益，同时也有利于性控技术在畜牧业领域的推广和应用。本发明提供的增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，将断奶后的雄性奶山羊生长过程分为断奶后、初情期、性成熟、初配期和体成熟5个阶段。各个阶段在基础日粮的基础上添加叶酸、蛋氨酸和VB12作为营养添加剂。在初配和体成熟阶段分别人工采集精液，发现在初配阶段精子活力在82%以上，X精子含量为77.5～80.0%,受精率在84.4%以上，体外受精后雌性胚胎比率为93.4%，发育到囊胚的比率为56.9%；在体成熟后精子活力在84%以上，X精子含量为73.1～76.1%,受精率在88.2%以上，体外受精后雌性胚胎比率为93.2%，发育到囊胚的比率在55.4%以上。该方法饲喂雄性奶山羊能显著提高X精子比率，从而获得更多的雌性胚胎。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。哺乳动物精原细胞在减数分裂起始，为防止某些酶类与性染色体发生作用，两条性染色体高度浓缩形成性体，保护性染色体不被破坏，并且关闭了性染色体特异基因的表达。而对奶山羊睾丸精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞进行转录组分析，结果表明在前两个阶段都表达的Y染色体特异性基因有Sry，在次级精母细胞阶段表达的有Ubely；X染色体特异性基因在精原细胞和初级精母细胞都表达的只有Xist，而在次级精母细胞阶段还可以检测到Ube1x和MHR6A。由于含有X或Y染色体的精子命运决定于第一次减数分裂之前即初级精母细胞的形成。此外，Sry基因的表达在减数分裂时有个峰值，是决定精母细胞正常分化成Y型精子细胞的前提，它必须在第一次减数分裂一个关键的时间点发挥作用。而关于营养、表观遗传修饰及功能之间的研究是以甲基化修饰为主，可以根据表观遗传学原理，在次级精母细胞形成前后对Sry基因的活性进行干预，从而促进含Y染色体精母细胞的降解和吸收，增加含X染色体精子的比率是可行的。为了从营养方面对Sry基因的活性进行干预，采用叶酸、蛋氨酸和VB12进行营养添加：叶酸、钴胺素(VB12)和蛋氨酸等参与一碳代谢，增加腺苷甲硫氨酸的量，为甲基化的进行提供原始甲基供体（-methyl）。腺苷甲硫氨酸对DNA甲基化是调控基因表达的一种主要表观遗传方式，在DNA上表现为CpG岛上的胞嘧啶甲基化。蛋氨酸和叶酸在甲基化过程中为主要的一碳供体，钴胺素为主要的辅助因子。因此给出以下饲喂方法及营养添加剂。一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法，包括以下操作：将雄性奶山羊在第6周断奶，然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂：第7～13周为断奶后、第14～19周为初情期、第20～25周为性成熟期、第26～30周为初配期、第31周后为体成熟期；在各个生长阶段每日喂养基础日粮，所述的基础日粮包括干草和混合精料，并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减；以质量比计，断奶后阶段内叶酸的补充比例为混合精料的3.0～4.0‰，补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶以0.5～1.0‰递减；VB12的补充量为叶酸的1/60～1/40，蛋氨酸的补充量为叶酸的1/2～1/3。进一步对叶酸、VB12和蛋氨酸的补充比例说明如下：断奶后：3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸；初情期：2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；性成熟期：1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；初配期：1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；体成熟期：0.8～1.2‰的叶酸、0.01～0.02‰的VB12和0.3～0.5‰的蛋氨酸。具体的，自断奶后阶段到体成熟期阶段阶，叶酸的补充比例以0.5‰递减，VB12的补充比例以0.01～0.015‰递减，蛋氨酸的补充比例以0.2～0.3‰递减。需要指出的是，上述的基础日粮可以参照现有的奶山羊的饲喂方法来进行饲喂，只要按照所给出的营养添加剂的比例进行营养补充和干预即可。下面给出具体的基础日粮、营养添加剂和动物实验。其中基础日粮、营养添加剂是对本发明的进一步的说明而非限定。1、实验动物雄性奶山羊30匹，出生重为2.5±0.3kg。平均分为两组，对照组和实验组。2、材料叶酸（食品级，含量99％以上）、钴胺素即VB12(食品级，含量99%以上)、蛋氨酸（饲料级DL-蛋氨酸，含量98.5%以上）。3、饲喂方法1）奶山羊第6周断奶，然后将其生长过程分为断奶后（第7～13周）、初情期（第14～19周）性成熟（第20～25周）、初配期（第26～30周）和体成熟（第31周后）5个阶段。各个阶段基础日粮配方见表1。表1各阶段基础日粮配方表ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>所述的预混料为：断奶期1%的预混精料：含硫酸锌0.5mg，硫酸锰0.15mg，氧化镁0.4mg，碘酸钾0.01mg，维生素A200国际单位，维生素D200国际单位，维生素E10国际单位；初情期、性成熟、初配期及体成熟期2%的预混精料：含五水硫酸铜2.5mg、七水硫酸亚铁6mg、七水硫酸锌12mg、硫酸锰10mg、碘化钾0.01mg、亚硒酸钠0.02mg、氯化钴0.03mg。2）在各个生长阶段补充叶酸、VB12和蛋氨酸，补充量以基础日粮中混合精料的量为基数，如表2所示。表2.各生长阶段叶酸、VB12和蛋氨酸的添加量ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>3）精液的采集初配期，连续采精3次，隔天一次；体成熟后连续采精3次，每天一次。在达到初配期或体成熟后，分别采集雄性奶山羊的精液，先进行X/Y精子比率分析，然后分离X精子并进行体外受精。对精子活力，X与Y精子含量及受精能力检测结果如表3所示。表3.人工采集鲜精，精子活力、Y/X精子含量及受精率等参数ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>注：N为实验羊只编号,C为对照组羊编号；受精率指体外受精后在培养箱中发育到2-细胞阶段的胚胎占总胚胎百分比；X/Y精子采用流式细胞仪进行分离；受精后胚胎采用巢式PCR进行性别检测。结果表明将断奶后的雄性奶山羊生长过程分为断奶后、初情期、性成熟、初配期和体成熟5个阶段。各个阶段在基础日粮的基础上添加叶酸、蛋氨酸和VB12。在初配和体成熟阶段分别人工采集精液，发现在初配阶段精子活力在82%以上，X精子含量为77.5～80.0%,受精率在84.4%以上，体外受精后雌性胚胎比率为93.4%，发育到囊胚的比率为56.9%；在体成熟后精子活力在84%以上，X精子含量为73.1～76.1%,受精率在88.2%以上，体外受精后雌性胚胎比率为93.2%，发育到囊胚的比率在55.4%以上。该方法饲喂雄性奶山羊能显著提高X精子比率，从而获得更多的雌性胚胎。依据上述营养添加剂的添加和饲喂，提出以下增加奶山羊X精子比率的营养添加剂，包括第1～5段营养添加剂，分别对应不同的生长阶段，以质量分数计，具体为：第1段营养添加剂，包括1段基准量的3.0～4.0‰的叶酸、0.07～0.09‰的VB12和1.2～2.0‰的蛋氨酸，1段基准量为180～200g。第2段营养添加剂，包括2段基准量的2.0～3.0‰的叶酸、0.05～0.06‰的VB12和0.8～1.5‰的蛋氨酸；2段基准量为220～250g；包括第3段营养添加剂，包括3段基准量的1.5～2.5‰的叶酸、0.04～0.05‰的VB12和0.6～1.2‰的蛋氨酸；3段基准量为300～350g。第4段营养添加剂，包括4段基准量的1.0～2.0‰的叶酸、0.03～0.04‰的VB12和0.5～0.8‰的蛋氨酸；4段基准量为450～500g；第5段养剂，包括5段基准量的0.8～1.2份的叶酸、0.01～0.02份的VB12和0.3～0.5份的蛋氨酸；5段基准量为500～550g。